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                  血細胞分析儀

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                  血細胞分析儀

                  發布日期:2022-06-16 作者: 點擊:

                  體積、電導、激光散射法(VCS)

                  這是Beckman-Coulter公司生產的血細胞分析儀所采用的經典分析方法,它集三種物理學檢測技術于一體,在細胞處于自然原始的狀態下對其進行多參數分析。該方法也稱為體積、電導、激光散射血細胞分析法。此技術采用在標本中首先加入紅細胞溶血劑溶解掉紅細胞,然后加入穩定劑來中和紅細胞溶解劑的作用,使白細胞表面、胞漿和細胞體積保持穩定不變。然后應用鞘流技術將細胞推進到流動細胞計數池(Flowcell)中,接受儀器VCS三種技術的檢測。
                  V代表體積(Volume)測量法,是采用經典的庫爾特專利技術,用低頻電流準確分析細胞體積。體積是區分白細胞亞群的一個重要的參數,它可有效區分體積大小差異顯著的淋巴細胞和單核細胞。
                  C代表高頻電導性(Conductivity),采用高頻電磁探針原理測量細胞內部結構間的差異,也是該公司的專利技術。細胞膜對高頻電流具有傳導性,當電流通過細胞時,細胞核的化學組份可使電流的傳導性產生變化,其變化量可以反映出細胞內含物的信息。該參數可用來區分體積相近而內部性質不同的細胞群體,如淋巴細胞和嗜堿性粒細胞,由于它們的細胞核特性不同而在傳導性參數上有所區別。
                  S代表激光散射(Scatter)測量技術,采用氦氖激光源發出的單色激光掃描每個細胞,收集細胞在10°~70°角度內出現的散射光 (MALS)信號。該激光束可穿透細胞,探測細胞內核分葉狀況和胞漿中的顆粒情況,提供有關細胞顆粒性的信息,可以區分出顆粒特性不同的細胞群體。例如細胞內顆粒粗的要比顆粒細的散射光更強,因此可以用于區分粒細胞中的嗜中性、嗜酸性和嗜堿性三種細胞。

                  電阻抗、射頻與細胞化學聯合檢測技術

                  典型機型如SysmexSE-9000/SE-9500/XE-2100等。這類儀器共有四個不同的檢測系統,將標本用特殊細胞染色技術處理后再應用RF和DC技術對白細胞進行分類和計數。其共采用如下四個檢測系統:
                  嗜酸性粒細胞檢測系統:該系統是利用電阻抗方式計數。血液經分血器分血后部分與嗜酸性粒細胞計數溶血劑混合,特異的溶血劑使嗜酸性粒細胞以外的所有細胞均溶解或萎縮,這種含完整嗜酸性粒細胞的液體經阻抗電路計數。
                  嗜堿性粒細胞系統:該系統檢測原理與嗜酸性粒細胞相同,不同的是其溶血劑只能保留血液中的嗜堿性粒細胞。
                  淋巴、單核、粒細胞(中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞)檢測系統:該系統采用電阻抗與射頻聯合檢測方式,使用作用較溫和的溶血劑,對核及細胞型態影響不大。在內外電極上存在直流和高頻兩個發射器。由于直流電不能達到細胞質及核質,而射頻電能透入胞內測量核大小和顆粒多少,因此這兩種不同的脈沖信號的個數及高低綜合反映了細胞數量、大?。―C)和核及顆粒密度(RF)。由于淋巴細胞、單核細胞及粒細胞的大小、細胞質含量、核形態與密度均有較大差異,故可通過掃描得出其比例。
                  幼稚細胞檢測系統:該系統也是利用電阻抗方式計數。其原理是由于幼稚細胞上的脂質較成熟細胞少,在細胞懸液中加入硫化氨基酸后,由于脂質占位不同,結合在幼稚細胞上的硫化氨基酸較成熟細胞多,且對溶血劑有抵抗作用,故能保持幼稚細胞的形態完整而溶解成熟細胞,即可通過阻抗法檢測。

                  激光散射和細胞化學染色技術

                  在白細胞分類上,儀器采用兩個通道進行,一個為過氧化酶檢測通道,另一個為嗜堿細胞檢測通道。
                  過氧化酶反應(peroxidase,POX)是血涂片染色的一個常用細胞化學染色方法,用于鑒別原始細胞與成熟的粒細胞,鑒別粒細胞與非粒細胞。染色后的細胞內無藍黑色顆粒出現為陰性反應,出現細小顆?;蛳∈铇臃植嫉暮谏w粒為弱陽性反應,出現黑色粗大而密集的顆粒為強陽性反應。過氧化物酶主要存在于粒細胞系和單核細胞系中,各類白細胞對過氧化物酶的反應是這樣的:早期的原始粒細胞為陰性,早幼粒以后的各階段都含有過氧化物酶,并隨著細胞的成熟過氧化酶含量逐漸增強,中性分葉核粒細胞會出現強陽性反應,嗜酸性粒細胞具有Z強的過氧化物酶反應,嗜堿粒細胞不含此酶呈陰性反應。在單核細胞系統,除早期原始階段外,幼稚單核和單核細胞會出現較弱的過氧化物酶反應。淋巴細胞、幼稚紅細胞、巨核細胞等都為過氧化物酶陰性反應。過氧化酶檢測通道就是根據這個原理設計的,它檢測每一個通過流動計數池中的白細胞,經過激光照射所產生的過氧化酶散射光吸收率,來當然試劑和輔助試劑均進行了改良。
                  1)過氧化酶Z強陽性的嗜酸性粒細胞;
                  2)過氧化酶強陽性的嗜中性分葉核粒細胞;
                  3)體積較大、過氧化酶弱陽性的單核細胞;
                  4)體積較小、過氧化物酶陰性的淋巴細胞;
                  5)體積大于淋巴細胞且過氧化物酶陰性的未染色大細胞,此類細胞增加提示幼稚或原始的各類細胞可能出現。
                  在嗜堿細胞通道中采用的檢測原理是:專用的嗜堿細胞試劑將除了嗜堿細胞以外的白細胞除去細胞膜,使其裸核化并體積變小,僅將嗜堿性粒細胞保持原有狀態,體積明顯大于其他類的白細胞。

                  多角度偏振光激光散射技術

                  美國雅培公司(ABBOTT)推出的血細胞分析儀,在白細胞分類中采用獨特的多角度偏振光散射(MAPSS)技術,其所生產的血細胞計數儀從CELL-DYN 3000,3200,3500,3700,4000,以及Sapphire(藍寶石),在白細胞分類上均采用了MAPSS技術。該技術基本原理是細胞在激光束的照射下,在多個角度都產生散射光,儀器在四個角度的四個檢測器將接收到的相應的散射光信號,然后經過微處理器分析處理,將各類細胞安置在散點圖上的相應位置,并計算出白細胞分類結果。
                  多角度偏振光散射白細胞分類技術(Multi—Angle Polatised Scatter Separation of white cell,MAPSS)其原理是一定體積的全血標本用鞘流液按適當比例稀釋。其白細胞內部結構近似于自然狀態,因嗜堿性粒細胞顆粒具有吸濕的特性,所以嗜堿性粒細胞的結構有輕微改變。紅細胞內部的滲透壓高于鞘液滲透壓而發生改變,紅細胞內的血紅蛋白從細胞內游離出來,而鞘液內的水分進入紅細胞中,細胞膜的結構仍然完整,但此時的紅細胞折光指數與鞘液的相同,故紅細胞不干擾白細胞檢測。在鞘流系統的作用下,樣本被集中為一個直徑30μm的小股液流,該液流將稀釋的血細胞單個排列,然后通過激光束,激光照射于細胞上,在各個方向都有其散射光出現。
                  1) 0°為前向角散射光,可粗略地測定細胞大??;
                  2) 10°為狹角散射光,可測細胞結構及其復雜性的相對特征;
                  3) 90°垂直光散射,主要對細胞內部顆粒和細胞成分進行測量。
                  4) 90°為消偏振光散射,基于顆??梢詫⒋怪苯嵌鹊钠窦す庀竦奶匦?,將嗜酸細胞從中性粒細胞和其它細胞中分離出來。
                  5) 這四個角度同時對單個白細胞進行測量和分析后,即可將白細胞劃分為嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、嗜堿性粒細胞、淋巴細胞和單核細胞5種。ABBOTT的五分類法定量很有意思,不用傳統的體積定量,而是采用數量定量,每次計數時完成10000個細胞測定即停止。


                  本文網址:http://www.mujonan.com/news/503.html

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